在CoIP（免疫共沉淀）实验中，细胞裂解液的选择核心依据是维持目标蛋白复合物的天然相互作用，同时保证足够的细胞裂解效率，降低非特异性结合。具体选择需结合目标蛋白的定位、溶解性以及蛋白间相互作用的强度来确定。

一、细胞裂解液的选择依据

1、优先保留蛋白-蛋白相互作用

    这是CoIP实验的核心前提，裂解液的离子强度、pH值和去污剂类型都必须温和，避免破坏目标蛋白复合物的稳定性。如果使用过强的变性条件（比如高浓度SDS、高温处理），会直接导致蛋白复合物解离，无法完成后续的共沉淀检测。

 

2、匹配目标蛋白的定位与溶解性

    对于可溶性的胞浆蛋白，仅需温和的非离子去污剂就能实现有效裂解；而对于膜蛋白、核蛋白或与细胞骨架结合的难溶性蛋白，则需要更强的去污剂组合，或额外添加辅助成分（如甘油、脱氧胆酸钠）来提升蛋白的溶解性。

 

3、减少非特异性结合与蛋白降解

    裂解液中通常需要添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，防止目标蛋白被降解或去磷酸化；同时通过优化离子强度（如调整NaCl浓度），降低杂蛋白与抗体、亲和珠的非特异性结合，保证实验结果的准确性。

 

4、适配后续实验流程

    裂解液的成分不能干扰抗体与抗原的结合能力，也不能影响ProteinA/G琼脂糖/磁珠的结合效率，否则会直接导致共沉淀实验失败。

二、去污剂NP-40与RIPA裂解液的区别

1、含NP-40的裂解液

    这类裂解液的核心成分是单一的非离子去污剂NP-40，裂解强度温和，仅能破坏细胞膜，不会破坏核膜。它可以使蛋白溶解在溶液中，但不会改变蛋白的天然构象，能最大程度保留蛋白间的相互作用，尤其适合检测相互作用较弱的蛋白复合物。

    它的适用对象主要是可溶性胞浆蛋白和膜表面蛋白，且实验背景较低，非特异性结合少。

 

2、RIPA裂解液

    RIPA裂解液是混合型去污剂体系，通常包含非离子去污剂（如TritonX-100）和阴离子去污剂（如脱氧胆酸钠、低浓度SDS），裂解强度远高于含NP-40的裂解液，既能破坏细胞膜，也能高效破坏核膜。

    它的优势是能溶解核蛋白、膜整合蛋白、细胞骨架结合蛋白等难溶性蛋白，但阴离子去污剂有一定概率解离不稳定的蛋白复合物，同时容易导致杂蛋白的非特异性结合，实验背景相对较高。因此用于CoIP实验时，通常需要降低其中SDS的浓度（一般不超过0.1%）。

 

三、补充说明

    除了这两种，实验中还会用到TritonX-100、Digitonin等去污剂。其中TritonX-100的性质与NP-40相近，可作为替代品；Digitonin的裂解作用更温和，能选择性破坏细胞膜而保留核膜，适合提取胞浆蛋白复合物。而强阴离子去污剂SDS则不能单独用于CoIP，仅能在RIPA中低浓度添加以提升膜蛋白的溶解性。